考马斯亮蓝G250染料试剂：《爱情鸟免费论坛》

考马斯亮蓝G250染料试剂产品货号：R23018产品规格：100ml/500ml产品简介：Bradford法是常用的蛋白浓度检测的方法，与传统方法相比，更简单、更稳定、兼容性更好。
  Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。
  样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。
  但受高浓度的去垢剂的影响明显，故在用BradfordProteinAssayKit进行蛋白定量时，需确保SDS低于0.01%，TritonX-100低于0.05%，Tween20,60,80低于0.015%，含高浓度去污剂的蛋白定量，建议采用BCAProteinAssayKit。
  考马斯亮蓝G250染料试剂由考马斯亮蓝G250、乙醇、磷酸组成，用于考马斯染料结合(Bradford)分析的总蛋白测量，其特点在于对蛋白样品中可能存在的大多数盐、溶剂、缓冲液、硫醇、金属螯合剂、还原性物质等均不排斥。
  检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μl，在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
  产品组成：产品名称规格保存条件考马斯亮蓝G250染料试剂100ml/500ml室温，避光自备材料：1.酶标仪或分光光度计2.蒸馏水3.96孔板操作步骤(仅供参考)：1.稀释蛋白标准(一般为BSA5mg/ml)使其终浓度为0.5mg/ml。
  注意：蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也应用什么溶液稀释，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准。
  2.将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20μl加到96孔板的蛋白标准孔中，加蛋白标准稀释液补足至20μl。
  3.加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加标准品稀释液至20μl。
  4.各孔加入200μl考马斯亮蓝G250染料试剂，室温放置3～5min。
  5.酶标仪测定595nm波长处的吸光值，560~610nm之间的波长也可。
  6.根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
  注意事项：1.待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
  2.需可检测560~610nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595nm。
  3.建议每次测定时都做标准曲线。
  因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定应每次都做标准曲线。
  4.如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，考虑根据比色皿的最小检测体积。
  应按比例适当加大考马斯亮蓝G250染料试剂的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。
  使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
  5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  有效期：6个月有效。
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